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电热恒温培养箱在微生物检测中的应用

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电热恒温培养箱在微生物检测中的应用

发布日期:2017-12-21 11:46 来源:http://www.truly-organic.com 点击:

常规菌检测的目的是一种指示菌,一般以CFU/ML来计量,比如总菌数和大肠菌群,这两个一般是用来评价食品被污染的程度,因为按常理,我们生活当中接触的致病菌还是相对较少的,而且人体本身也具有免疫功能,所以如果这两个指示菌如果不超标的话,我们就有理由相信该食品是相对安全的,注意:不是绝对安全。

传统的检测方法也很简单,一般就是培养富集后计数,其大致流程是这样:

1)取样,一般都是取25g样品加入到225ml的生理盐水中,取样方法会根据样品不同有所不同。比如肉制品,可以用剪刀剪碎。

2)均质,要保证均质的力度不能太大,如果太大有可能损害样品中的微生物,有些检验人员可能就是用手捏一捏,甩一甩,也有用拍击式均质器的。

3)稀释,一般来说稀释3个梯度,10倍,100倍,1000倍,而且每个稀释梯度要倒两个平板。

4)培养,把事先准备好的培养基(培养基的制备,一般要经过配比,高压灭菌等过程,当然也有配制好的商业培养基,进口的有MERCK,国产的也很多,比如陆桥)倒平板,然后划线培养或者涂抹均匀即可,只要保证尽量把含菌的稀释液涂抹开,不要有菌落重叠的现象,然后放入恒温培养箱的进行培养,培养温度与所检测微生物不同而不同,比如大肠菌群是37度,粪大肠菌群要略高一点。

5)计数,找一个比较容易计数的梯度进行计数,然后根据稀释倍数反推出样品中的微生物,计数说简单点就是数菌落的数量,如果你涂抹够开的话,每个培养前的微生物会长成一个菌落,所以个1个菌落就代表1个培养前的微生物。(说到这,我就想起我以前老是想,一个菌落是由很多个微生物组成的,光数菌落怎么会得出样品中微生物的个数呢?这就是没有考虑培养前与培养后的变化。

常规菌大概就是这样啦,目前大多数检验单位都在使用这种传统的培养方法,其优点就是便宜,廉价,但是比较慢,如今市面上有很多总菌数和大肠菌群的快速商业方法,比如3M,他们在纸片上提供现成的培养基,只需把稀释液直接接种到培养基即可,相比较而言,节省了我们制备培养基的时间,不过貌似在培养时间上并没有缩短。还有检测培养基电导率方法来检测的,因为培养前,培养基都是大分子物质,这些物质的电导率相对较低,经过微生物代谢后,被分解为小分子物质,所以电导率急剧增加,通过建一个曲线来反推微生物的个数。

致病菌的检测是不得检出的,所以要比常规菌要复杂,所耗时间更长,有可能还需要用没有选择性的培养基进行前增菌,然后再用选择性培养基进行增菌,如果有可疑菌落再挑取利用生化反应进行鉴定。

比如沙门氏菌,检测流程大致如下:

1)取样,同常规菌

2)均质,同常规菌

3)前增菌,先要用无选择性的培养基进行富集增菌,因为有可能样品中所含的沙门氏菌受伤,或较少,直接用选择性培养基培养的话,沙门氏菌不会生长,从而出现假阴性。

4)增菌,用选择性的培养基进行培养,这样大部分的微生物在选择性的培养基上都不会生长,就如同过滤一样,如果长菌,根据菌落形态学来判断到底是否为可疑菌落,如果没有可疑菌落,可以判定为阴性,如果有,挑取并做生化反应鉴定是否是真的沙门氏菌。

5)做生化反应进行鉴定,这里就不说了,我也不太清楚,就知道有这个流程。


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